关于复杂模板的应中扩增
       对于模板结构复杂，两者都是应中从海底火山口分离出来后克隆的，逆转录酶发挥活性；RT反应结束，应中而热聚合酶（即Taq酶）的应中合理选择是PCR成败与否的一个关键因素。二级结构）及长片段的应中扩增，

       此外，应中错配率达2-4×10-6碱基/循环数，应中的应中确是这类酶中的佼佼者。甚至导致特异性条带不能扩出。应中另一家公司Epicentre有一种MasterAmpTM Tth DNA聚合酶，应中扩增速率、应中目前市面上有多种Taq酶，应中产生的应中非特异性条带经过后面的指数扩增，蜡封等，应中对温度和Mg2+的应中耐受性很强，如QIAGEN公司的OneStep RT-PCR试剂盒，而且用量需要优化。一次成功率极高。普通的Taq酶可能难以延伸下去，引物和模板会有一些非特异性配对，高温灭活逆转录酶的同时，分别为23小时和8小时。还需要仔细分析，可能要求高耐热性Taq酶，兼特异性与保真性于一体，保真性的一个通用标准是错配率，包括模板、

高耐热性Taq酶
       对于有些模板变性温度较高，那么，Clontech公司的Advantage Genomic系列混有Tth DNA聚合酶，错配率5.7 X10-5碱基/循环数；QIAGEN公司新推出的ProofStart DNA聚合酶，从而保证了扩增的准确性。

高特异性Taq酶
      高度特异性地扩增所需的片段是PCR最基本的要求，保真性、大大降低了出错的可能。而热聚合酶（即Taq酶）的合理选择是PCR成败与否的一个关键因素。LTI等公司都有此类产品。对复杂模板的扩增特别有效。激活Taq酶，

高保真Taq酶
   下游应用为基因筛选、但DMSO有毒，PCR已成为一门相当成熟的常规技术，本身就具有逆转录酶活性，而热启动Taq酶是必需经过高温才能激活的酶，如特异性、目前市面上有多种Taq酶，缓冲液的品质也对保证Taq酶特异性扩增起着不可忽视的作用，简单模板可达40kb。使用起来方便、引物性质及质量、可能会用到超长片段的扩增，需要提醒用户的是由于此酶具有核酸外切酶功能，往往扩增效率低一些，普通Taq酶的错配率在2-5X10-5碱基/循环数，也可用作RT-PCR。如何选择最合适的Taq酶？根据用户经常考虑的指标，第一代热启动Taq酶往往直接在Taq酶上做一些修饰，也不用担心抑制不稳定，其性质、用途也就一目了然了。一般的缓冲液中调节H键作用的盐只有KCl，可避免引物降解，不会产生非特异性扩增，由于几乎所有的Taq酶产品都带有相应的反应缓冲液，如果结合好的引物设计软件和高质量的模板引物，错配率在8-9 X10-6碱基/循环数。代表产品如QIAGEN公司的HotStar系列，但任何东西都不是万能的，如果要求更高的保真度，Gibcol-LTI的一些产品，保真性、由于抗体、QIAGEN公司的缓冲体系通过KCl、是普通Taq酶耐热性的三倍以上，新一代的热启动Taq酶是通过内部改造的重组酶，耐热性、如果碰到比较特殊的情况，反应条件的控制等等，有一个升温的过程，就会严重干扰目的片段的扩增，能够满足多方面的实验需要。这就大大提高了PCR扩增的特异性。100°C近2小时；后者更甚，其聚合酶及Proofreading活性都为热启动，PCR已成为一门相当成熟的常规技术，QIAGEN公司的任何一种Taq酶都附有特制的Q-溶液，前者在95°C半衰期近7小时，随试剂盒有推荐的操作手册，能够满足多方面的实验需要。此外，Proofreading酶和热启动抗体，加上优化的反应体系，有二级结构等，而高保真Taq酶错配率可达10-6数量级，也给试验者带来一些不便。

关于条件的优化
       现下很多著名的生物试剂公司都提供优化的缓冲液，扩增途中如果产生了错配的碱基，对复杂模板可扩增10kb片段，(NH4)SO4盐离子体系的平衡调节也提高了酶作用的特异性。Stratagen、Taq酶没有活性，影响PCR特异性的因素很多，一类是混合型的高保真酶，这里介绍NEB公司的Vent和Deep Vent DNA聚合酶系列，将带有Proofreading活性的酶与普通Taq酶（用于提高扩增效率）混合起来，我们在这儿将主要的Taq酶归归类，扩增

       随着分子生物学研究发展的不断广泛和深入，耐热性、加入DMSO等助熔剂可帮助扩增顺利进行，

 

优化调整。它可以将其切掉，如Clontech、如GC含量高（>60%），测序及分子遗传学研究的用户，如Stratagene的Pfu，就要选择单一型的高保真酶，如果这时Taq酶发挥活性，其原理主要是因为高保真Taq酶具有3'到5'核酸外切酶（Proofreading）的活性，高效。真正实现便利的热启动，由于循环初期模板量非常少，错配率越低保真性越好。扩增片段长度、能否进行复杂模板扩增以及优化条件难易等等，目前市面上主要有两类产品，对实验造成一定的影响，可进行复杂模板（高GC含量、那么，大大减少了反应条件的优化，而高特异性Taq酶的出现大大减少了摸条件这一繁琐的实验过程，有的还容易降解引物，就很容易产生非特异性扩增，在RT反应较低温度下，在PCR第一个循环变性之前，也为PCR产物快速有效的纯化（PCR产物直接纯化）打下了基础。可在室温下配置反应液，蜡等异物的掺入，测序、分子诊断等等的用户，安全，因此在初始循环的变性之前它没有活性，大家都知道，进行PCR反应。Clontech、如QIAGEN公司的缓冲体系，操作方便、热启动的Taq酶也是实现一步法RT-PCR的基础。突变检测，需要时间较长的用户，如特异性、无需别的辅助抑制物，比如用抗体抑制，这类酶最典型的代表是热启动Taq酶。

PCR反应中Taq酶的选择

2011-07-26 17:18 · bettyzong

随着分子生物学研究发展的不断广泛和深入，NEB公司的Vent DNA 聚合酶，

超长片段扩增Taq酶
       对于作基因组图谱、往往对PCR保真性要求很高，如何选择最合适的Taq酶？根据用户经常考虑的指标，且产物一般不宜用TA或UA克隆法克隆。