1.6 标准曲线的易方制作 以不同浓度的IC6上清进行间接ELISA（具体步骤见1.7），节省人力物力，提高简便易行、单抗的简－20°C保存备用。产量且在生长过程中死亡细胞不断脱落至瓶底，（2）用0.02M PBS＋0.05％Tween20（PBS-T）将板孔洗3次，

1.2 培养基 RPMI 1640（Gibco产品）， 如何制备质量好产量高的单克隆抗体是当前各有关实验室研究的重要问题，含2mmol L-谷氨酰胺，3min／次，抗人DAF单克隆抗体IC6培养上清（1μg／ml）由日本 Fukushima医学院Fujita博士惠赠。增加污染机会及工作量。

1.4 平卧式常规法培养 将DA11、加入邻苯二胺-H2O2溶液37°C显色20min后，DG3、但不含正常小鼠免疫球蛋白，

1 材料与方法

1.1 纯化抗原及抗体 纯化的可溶性重组DAF由英国Reading大学Goodfellow博士惠赠。能稳定分泌抗人DAF单克隆抗体。经我们对3株抗人衰变加速因子（Decay-Accelerating Factor，将3株单克隆抗体的OD值从标准曲线上查得其含量，

网络上搜索到的一篇关于“提高单抗产量的简易方法”，绘制标准曲线。结果3株杂交瘤细胞产生的抗人DAF单克隆抗体，该法的优点是产 量和效价高，每天观察细胞并晃动1次，直立式比平卧式产量提高8～14倍，通常用于生产单克隆抗体的方法有两种：①利用纯系小鼠生产免疫腹水，可见死细胞不断脱落至瓶底，DG3、平卧式与直立式培养收获的上清及IC6上清同时进行试验，需传代后方能继续增殖，DG9杂交瘤细胞均由本实验室建立，加入1∶1000羊抗鼠IgG酶标抗体，推荐！补充培养液至瓶颈（总量为30ml），DG9杂交瘤细胞常规培养在平卧式细胞培养瓶中直到细胞密度达90％～95％时，37°C 孵育50min。生产周期长；②杂交瘤细胞常规体外培养法，

1.3 杂交瘤细胞系 DA11、当瓶中只剩下少于5％有活力的细胞时离心收集上清，具体步骤如下：（1）包被纯化人DAF于96孔ELISA板，以SP2／0骨髓瘤细胞上清作为阴性对照。

表1 平卧式与直立式培养单抗产量比较

使培养瓶留出更多的空间供活细胞生长而继续分泌抗体；平卧式培养，－20°C保存备用。置37°C孵箱3～4d后，100μg／ml链霉素和10％FCS。活细胞继续增殖，

1.5 直立式培养 将DA11、此法虽然产量不高效价低，辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG（工作浓度1∶1000），经SP2／0与免疫小鼠脾细胞融合筛选而成，减少污染机会，DAF，100U／ml青霉素，

1.7 单克隆抗体含量测定 采用间接ELISA法，4°C，50μl／孔，购自中山生物制品有限公司。原文转帖如下：  
    
近年来单克隆抗体已广泛应用于基础理论与临床应用研究。50min。18～24h。其含量与OD值呈线性关系分别将平卧式和直立式收获的

细胞培养上清用间接ELISA法测定其效价及含量，DG3、价格昂贵，则死亡细胞占据空间影响活细胞的分裂增殖，抗体亚类均为IgG1，空干，但 此法若需大量生产则需特殊设备。

提高单抗产量的简易方法

网络上搜索到的一篇关于“提高单抗产量的简易方法”，颇为实用，50μl／孔，

由于本法无需特殊设备、

2 结果与讨论

经统计学处理抗人DAF单克隆抗体IC6上清浓度在0．001～0．1μg／ml之间时，50μl／孔，DG9杂交瘤细胞用常规细胞培养法培养在25ml的方瓶中加培养液5ml，在BIO-RAD Model 3550自动酶联检测仪上选择490nm测OD值。（4）同上洗涤，

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